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產品名稱:胰腺癌*培養基(Human Pancreatic Carcinoma Cell Medium)
產品說明:胰腺癌*培養基(Human Pancreatic Carcinoma Cell Medium)是一種為促進胰腺癌原代細胞體外生長而設計的培養基。它是一種無菌的液體混合系統,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時,pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想平衡的營養環境,選擇性地促進體外人胰腺癌原代細胞的生長。
產品優勢:
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結果與臨床數據接近
使用說明:
?使用前準備
(1)DMEM/F12培養基稀釋后的基質膠(Corning#356231)(100倍稀釋,現配現用)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。
(3)提前30min從4℃冰箱取出*培養基平衡至室溫。
?胰腺癌原代細胞培養
(1)至少提前半小時使用稀釋后的基質膠預鋪培養瓶/板,使用前吸干基質膠,用稀釋液潤洗一遍。
(2)將分離并計數后的細胞懸液參考表1中細胞數量接種于培養瓶/板,補加*培養基至所需體積,輕搖晃混勻,表面消毒后放置培養箱,37℃、5%CO2條件培養。
(3)原代細胞初次接種后2-3天內勿動(利于細胞貼壁),第一次換液建議換半液。
?胰腺癌原代細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2)培養箱中取出細胞,棄舊培養液,加入0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5min后拿出輕拍培養瓶/板側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用終止培養基終止消化,并將細胞轉移至離心管中,1500rpm離心3 min。
(4)棄上清,以1-2mL*培養基重懸細胞,活細胞計數,將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板,補加*培養基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養箱,37℃、5% CO2條件培養。其他步驟同上。
注意事項:
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產品時應注意無菌操作,避免污染。
3.本產品中含低濃度血清和原代細胞專用抗生素,如無特殊需要無需額外添加血清和抗生素。
4.為保持本產品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
5.樣本需為胰腺癌術中樣本,且腫瘤細胞比例越高(至少>50%),培養成功率越高,不推薦用于少量樣本(如穿刺或者循環腫瘤細胞)的培養。
6.請于保質期內使用本產品,超出保質期,必須放棄使用。
7.本產品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。